V8蛋白酶
2019/8/8 9:18:32
V8蛋白酶
EC:3.4.21.19
全名: 序列分析纯V8蛋白酶;金黄色葡萄球菌V8蛋白酶
别名: V8蛋白酶;谷氨酰胺内切酶;天冬酰胺内切酶
储存条件:冻干粉,2-8℃
来源:基因工程生产,大肠杆菌表达。
1.产品简介
V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族,能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键,在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键,且对Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性,最适pH为8.0-8.5。在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时,可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸(DFP)、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)。
2.产品特性
单位定义:在25℃,pH7.8的条件下,每分钟催化底物(Z-Phe-Leu-Glu-4-nitranilide)生成1μmol对硝基苯胺(4-nitroaniline)所需要的酶量为一个酶活性单位。
3.储存和运输稳定性
储存稳定性:重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;
溶解后稳定性:用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下(1mg/ml),6个月稳定;用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃(1mg/ml,无菌),2个月稳定;用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃(0.5mg/ml)12h,活性可维持85%以上;溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。
运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。
4.推荐使用方法
1)使用前注意
可按使用量分装以最大限度避免污染或自切。
2)目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白,例如25-50mM NH4HCO3 pH7.8,若溶解度不好对目的蛋白变性,添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。
3)酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100(W/W),25℃或37℃酶切2-18h。
表一:V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂,尿素25℃2h,SDS25℃12h的稳定性
(注:V8蛋白酶0.5mg/ml,50mM Tris-HCl pH8.0)
5.产品优势
序列分析纯蛋白酶:特异性高,稳定性好。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。
质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产 品批次间无差异,质量稳定。
纯度高:比活高;宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
冻干粉:易于储存和运输。
符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。
质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
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EC:3.4.21.19
全名: 序列分析纯V8蛋白酶;金黄色葡萄球菌V8蛋白酶
别名: V8蛋白酶;谷氨酰胺内切酶;天冬酰胺内切酶
储存条件:冻干粉,2-8℃
来源:基因工程生产,大肠杆菌表达。
1.产品简介
V8蛋白酶属于丝氨酸蛋白酶家族,能特异水解谷氨酸或天冬氨酸残基羧基侧肽键。在pH 7.8的NH4HCO3和pH 4.0的CH3COONH4缓冲液中识别并切割Glu羧基端肽键,在pH 7.8的磷酸盐缓冲液中识别并切割Glu或Asp羧基端肽键,且对Glu的水解速率高于Asp。V8蛋白酶在pH4.0-10.0之间均有活性,最适pH为8.0-8.5。在进行蛋白质酶切测序、肽图谱分析和肽质量指纹图谱分析中使用时,可以单独使用或与其他蛋白酶混合使用。V8蛋白酶的抑制剂有二异丙基氟磷酸(DFP)、α2- 巨球蛋白和Nα-P-甲苯磺酰基-L-赖氨酸氯甲基酮(TLCK)。
2.产品特性
来源 | 重组大肠杆菌 |
产品外观 | 白色、类白色、类黄色粉末 |
比活 | ≥ 5.0 U /mg pro. |
蛋白电泳 | 单一主条带 |
分子量 | 24.0±2.4 kDa |
3.储存和运输稳定性
储存稳定性:重组V8蛋白酶冻干粉存于2-8℃,24个月稳定;
溶解后稳定性:用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于-20℃ 以下(1mg/ml),6个月稳定;用水或50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于4℃(1mg/ml,无菌),2个月稳定;用50mM Tris-HCl pH8.0溶解以后存于25℃或37℃(0.5mg/ml)12h,活性可维持85%以上;溶解后溶液可反复冻融10次无活性损失。
运输稳定性:蓝冰保温运输,活性稳定。
4.推荐使用方法
1)使用前注意
可按使用量分装以最大限度避免污染或自切。
2)目的蛋白溶解
用酶切buffer溶解目的蛋白,例如25-50mM NH4HCO3 pH7.8,若溶解度不好对目的蛋白变性,添加尿素、SDS、DTT或加热。尿素和SDS对V8蛋白酶的影响见表一。
3)酶切
V8蛋白酶和目的蛋白推荐比例为1/20-1/100(W/W),25℃或37℃酶切2-18h。
表一:V8蛋白酶在含有不同浓度变性剂,尿素25℃2h,SDS25℃12h的稳定性
(注:V8蛋白酶0.5mg/ml,50mM Tris-HCl pH8.0)
变性剂 | 浓度 | 残余酶活 |
不添加 | 0 | 100% |
尿素 | 2M | 95% |
5M | 12% | |
8M | 0 | |
SDS | 0.1% | 90% |
0.5% | 80% | |
1% | 50% |
5.产品优势
序列分析纯蛋白酶:特异性高,稳定性好。
无动物源性:重组生产,无外源性的病毒污染,生产过程不使用任何动物源原料。
质量稳定:批量生产,可保证稳定连续的批次生产;产 品批次间无差异,质量稳定。
纯度高:比活高;宿主蛋白残留小于生物制品限度要求。
冻干粉:易于储存和运输。
符合法规要求:生产设备和生产环境符合相关法规要求,生产过程完全遵循NSF ISO 9001:2015质量体系并符合GMP指导原则。
质量文件完整:按客户需求,可提供相关法规支持文件。
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